PCR實驗室布局

原則上分為四個區(qū)域：試劑準備區(qū),、樣品制備區(qū),、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū),。

PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū),、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設有專用走廊,，各工作區(qū)域應設緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置,。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,，各工作區(qū)有明顯的標志，不能直通,，如果緊密相連,，需安裝物品傳遞窗。

PCR實驗室區(qū)域的設置并不是一成不變的,，以下幾種情況需要說明：

1.如果樣本在擴增之前需要粉碎處理,，則需要增加一個區(qū)域用于樣品的粉碎。

2.如果采用實時熒光PCR法,，則擴增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個區(qū),。

3.如果采用全自動化PCR分析儀，則標本制備區(qū),、擴增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個區(qū),。

前兩區(qū)為擴增前區(qū)，后兩區(qū)為擴增后區(qū),，擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開,。實驗材料、試劑,、記錄紙,、筆,、清潔材料等，只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),，即從試劑準備區(qū),、樣品制備區(qū)到擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動,。實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),，不得逆向流動,。各工作區(qū)頂部應安裝紫外燈,，紫外燈的波長為254nm，每20㎡一支40W的紫外燈,。

二.實驗室各區(qū)功能及主要設備

原則上的四大區(qū)域注意正壓負壓的控制,。

1.試劑準備區(qū)：

主要進行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備,。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū),，不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內,，并在本區(qū)內制備成所需的試劑,。本區(qū)主要設備有天平、冰箱,、離心機,、加樣器、振蕩器等,。

對于氣流壓力的控制,，本區(qū)并沒有嚴格的要求。

2.樣品制備區(qū)：

主要進行樣品的保存,、核酸(RNA,、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成,。本區(qū)主要設備有冰箱,、生物安全柜、離心機,、加樣器,、振蕩器、恒溫水浴等,。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓,，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。

3.擴增區(qū)：

該區(qū)域的功能是DNA擴增和擴增片段的測定,。此外,，反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液和已制備的DNA模板(來自標本制備區(qū))的加入等也可在本區(qū)內進行,。對于氣流壓力的控制，相對于鄰近區(qū)域為負壓,，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出,。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內不必要的走動,。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行,。

該區(qū)域的設備主要是核酸擴增熱循環(huán)儀、加樣器,、超凈臺等,。其中熱循環(huán)儀的電源應專用，并配備一個穩(wěn)壓電源或UPS,，以防止由于電壓的波動對擴增測定的影響主要進行DNA擴增,。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出,。

4.擴增產(chǎn)物分析區(qū)：

擴增產(chǎn)物的測定,。本區(qū)主要設備有酶標儀、洗板機,、加樣器和水浴箱等,。

本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域